背景:骨形态发生蛋白2是诱导成骨关键物质,参与调节从细胞增殖、决定种系分化方向到细胞死亡等一系列的生物过程.
目的:利用AdMax系统构建人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体并鉴定.
方法:以人cDNA为模板PCR扩增人骨形态发生蛋白2基因,转化E.coli感受态细胞,经菌落PCR鉴定阳性转化子、阳性克隆测序无误后,扩增、抽提.将带有目的基因的腺病毒表达载体和携带有腺病毒大部分基因的辅助包装质粒共转染293细胞进行病毒包装扩增,PCR检测目的基因、Western Blot检测目的蛋白及终点稀释法检测病毒滴度.
结果与结论:PCR获得长度为1223 bp的人骨形态发生蛋白2目的基因片段,同源重组表达载体经阳性克隆PCR及测序鉴定,结果正确.293细胞内包装、扩增,经Western blot及PCR鉴定无误后,获得病毒滴度为5×1013 pfu/L的重组腺病毒.实验成功构建携带有人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体.
作者：邱俊钦；尹承慧；曾昭勋；陈宗雄
来源：中国组织工程研究 2012 年 50期
