背景:从深低温冻存脐血中获得大量高纯度无滋养层细胞、无动物源成分的NK细胞,以便更好地开展NK细胞杀伤肿瘤的实验研究,此次研究通过使用NK扩增培养试剂盒和血清替代物,以获得安全、高效的体外扩增培养NK细胞的方法.目的:建立一种从冷冻脐血中采用纯细胞因子扩增NK细胞的技术体系并证明其体外杀瘤能力.方法:解冻液氮存储的冻存脐血,优化复苏体系,采用Ficoll密度梯度离心的方法收集脐血单个核细胞,接种于预先铺板的T175培养瓶中,采用细胞因子试剂盒+血清替代物法培养21 d后收集细胞并计数,应用流式细胞术检测细胞中CD3-CD56+的比例,并将所得数据与K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法进行对比分析.同时以髓系白血病细胞K562为靶细胞,采用CCK-8试剂盒检测不同效靶比NK细胞杀伤K562细胞的作用.最后进行了12 h内的模拟储存运输实验,采用流式检测CD3-CD56+的比例变化,并使用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与结论:①采用K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法扩增培养14 d,细胞扩增(51.47±4.28)倍;采用细胞因子试剂盒+血清替代物法扩增培养21 d,细胞数量5×109以上,细胞扩增(328.32±116.36)倍,细胞扩增倍数明显升高,2种方法获得的CD3-CD56+纯度比例均在80％以上,未见明显差异;②纯细胞因子方法培养后的
作者：刁小娟；石超群；李栋；王帅；肖春；刘国军；曲廷瑜；杨卫娟；贾晓鹏
来源：中国组织工程研究 2023 年 27卷 10期
