背景:目前获取原代皮质神经元和星形胶质细胞的方法很多,传统方法通常是分别获取这两种细胞,但实验方法过于繁琐且浪费实验材料.找到一种简单、经济、可行并同时提取这两种细胞的培养方法尤为重要.目的:观察同时提取培养SD乳鼠大脑皮质神经元及星形胶质细胞的效果及注意事项.方法:选用出生24 h内的SD乳鼠,用体积分数为75％乙醇浸泡消毒,待乳鼠昏迷后断脊处死,沿乳鼠颈部用剪刀离断头颅并放入装有高糖DMEM的小烧杯中,沿矢状缝打开头颅并取出大脑放入盛有高糖DMEM的培养皿中.在冰上剥出脑膜及血管,夹取皮质表面2.0-3.0 mm的脑组织,通过木瓜酶和DNA酶进行消化20 min,用含有体积分数为10％胎牛血清的DMEM/F12终止消化.以细胞浓度为1.0×109 L-1种植于含有爬片(用多聚赖氨酸处理)的6孔板中,分别于1,3,5,7 d通过倒置荧光显微镜下观察神经元的形态变化,使用Calcien-AM进行活细胞染色观察细胞活性,β-Tubulin、MAP2免疫荧光染色对神经元进行鉴定.将剩余大脑皮质进行星形胶质细胞的提取,经过胰酶消化、过滤、吹打,以适宜的浓度接种于培养瓶中,待细胞融合度达到90％时,进行恒温水平摇床振荡24 h以纯化星形胶质细胞.当细胞传代纯化后以1.0×109 L-1接种于6孔板中培养,GFAP免疫荧光染色对星形胶质细胞进行鉴定.结果
作者：明江；廖益东；宋文学；穆德勇；刘宗伟；徐卡娅
来源：中国组织工程研究 2023 年 27卷 15期
