目的:建立Poly(A)加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测血清微RNA?122(miR?122)水平,并初步探讨其临床应用价值。方法选取2013年9月至2014年9月本院就诊的糖尿病患者和健康体检者120例为研究对象,分为糖尿病脂质代谢紊乱组(n=40)、糖尿病非脂质代谢紊乱组(n=40)和对照组(n=40)。提取血清总RNA,miR?122 Poly(A)聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green I实时荧光定量PCR扩增。制作C.elegans?miR?39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线定量检测血清miR?122水平,进行3组血清miR?122水平的组间比较。结果该方法可定量检测血清miR?122水平,PCR扩增产物特异性好,熔解曲线呈单峰;检测灵敏度为102拷贝/μl,检测线性范围102~107拷贝/μl。高、中、低浓度样本重复性检测的批内变异系数(CV)分别为2.23
作者:陈曦;陈鑫;韩霜;朱宏斌;周玉贵
来源:中华生物医学工程杂志 2016 年 22卷 3期