目的 研究Lgr5 shRNA重组质粒沉默结直肠癌细胞中Lgr5表达对血管生成的影响.方法 针对Lgr5 mRNA构建Lgr5 shRNA重组质粒,通过实时荧光定量PCR和western blot方法筛选出在SW620细胞中抑制效率最高的重组质粒；将筛选出的重组质粒和阴性对照重组质粒瞬时转染进SW620细胞,48h后收集条件培养基.用条件培养基培养hMVECs细胞,观察hMVECs细胞在Matrigel上毛细血管管腔样结构的形成情况;将吸附了相应条件培养基的明胶海绵置于鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,72 h后利用Image Pro Plus6.0采集数据并计算各组CAM血管面积比.结果 在4种Lgr5 shRNA重组质粒中Lgr5 shRNA 874在SW620细胞中对Lgr5 mRNA和蛋白的抑制程度最高,分别为64.7％和44.7％.Lgr5 shRNA 874组条件培养基培养hMVECs后Matrigel上的管腔数目显著少于NC组(P=0.002).条件培养基作用于CAM 72h后,Lgr5 shRNA 874组CAM上微小血管数目较无血清培养基(SFM)组和NC组显著减少,Lgr5shRNA 874组血管面积比与SFM组和NC组相比,差异有统计学意义(P值均为0.000).结论 沉默结直肠癌细胞中Lgr5表达后能显著抑制hMVECs毛细血管管腔样结构的形成,同时可以抑制CAM模型上微小血管生成,证实了抑制结直肠癌细胞中Lgr5表达对体外血管生成有一定的抑制作用.

作者：王保才；彭亮；梁燕；张昱；苏宁；王新颖；姜泊

来源：现代消化及介入诊疗 2011 年 16卷 5期