[目的]构建我国流行的周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)部分编码基因原核和真核表达质粒以及基因序列分析,为进一步的研究奠定基础.[方法]根据GeneBank中马来丝虫GAPDH基因的已知序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因.扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmGAPDH,经测序验证,并进行同源性比较.亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+).构建真核表达戴体pcDNA3.1(+)-BmGAPDH,转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证.[结果]RT-PCR扩增出一条约877bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99
作者：张赛楠；方政；童海燕；方浩；谢东方；黄为群；徐邦生
来源：现代预防医学 2010 年 37卷 22期
