目的 探讨整合素αvβ5在结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)促进肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)细胞外基质沉积中的作用;明确细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路是否参与了CTGF-整合素αvβ5信号途径所致PASMC上述生物学行为改变的过程;初步探讨CTGF-整合素αvβ5受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用.方法 (1)体外培养SD大鼠PASMC,并用α-SMA免疫组织化学染色鉴定细胞纯度.对照组:含10%胎牛血清的M199培养基;CTGF刺激组(CTGF组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/mlCTGF,培养72 h;CTGF+整合素αvβ5单克隆抗体P1F6(10 μg/ml)刺激组(抗体组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/ml CTGF+ 10 μg/ml P1F6,培养72 h.(2)实时荧光定量RT-PCR检测CTGF、P1F6对Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达的影响.(3)采用蛋白质印迹检测P1F6、CTGF对CollagenⅢ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达变化的影响.结果 (1)免疫组织化学染色显示,α-SMA染色阳性细胞大于95%,表明其为PASMC.(2)RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,CT-GF作用于PASMC 72 h,CTGF能显著促进Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达(P<0.05);使用P1F
作者:卢翠侠;付杰;李刚;胡煜;贾鹏;赵建;陈芃螈;刘斌
来源:中国小儿急救医学 2015 年 22卷 3期