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目的 探讨整合素αvβ5在结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)促进肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)细胞外基质沉积中的作用;明确细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路是否参与了CTGF-整合素αvβ5信号途径所致PASMC上述生物学行为改变的过程;初步探讨CTGF-整合素αvβ5受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用.方法 (1)体外培养SD大鼠PASMC,并用α-SMA免疫组织化学染色鉴定细胞纯度.对照组:含10%胎牛血清的M199培养基;CTGF刺激组(CTGF组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/mlCTGF,培养72 h;CTGF+整合素αvβ5单克隆抗体P1F6(10 μg/ml)刺激组(抗体组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/ml CTGF+ 10 μg/ml P1F6,培养72 h.(2)实时荧光定量RT-PCR检测CTGF、P1F6对Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达的影响.(3)采用蛋白质印迹检测P1F6、CTGF对CollagenⅢ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达变化的影响.结果 (1)免疫组织化学染色显示,α-SMA染色阳性细胞大于95%,表明其为PASMC.(2)RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,CT-GF作用于PASMC 72 h,CTGF能显著促进Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达(P<0.05);使用P1F

作者:卢翠侠;付杰;李刚;胡煜;贾鹏;赵建;陈芃螈;刘斌

来源:中国小儿急救医学 2015 年 22卷 3期

知识库介绍

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卢翠侠;付杰;李刚;胡煜;贾鹏;赵建;陈芃螈;刘斌
来源:
中国小儿急救医学 2015 年 22卷 3期
标签:
整合素 结缔组织生长因子 肺动脉平滑肌细胞 细胞外基质 细胞外调节蛋白激酶 大鼠 Integrin Connective tissue growth factor Pulmonary artery smooth muscle cell Extracellular matrix Extracellular regulated protein kinase Rat
目的 探讨整合素αvβ5在结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)促进肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)细胞外基质沉积中的作用;明确细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路是否参与了CTGF-整合素αvβ5信号途径所致PASMC上述生物学行为改变的过程;初步探讨CTGF-整合素αvβ5受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用.方法 (1)体外培养SD大鼠PASMC,并用α-SMA免疫组织化学染色鉴定细胞纯度.对照组:含10%胎牛血清的M199培养基;CTGF刺激组(CTGF组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/mlCTGF,培养72 h;CTGF+整合素αvβ5单克隆抗体P1F6(10 μg/ml)刺激组(抗体组):含10%胎牛血清的M199培养基+50 ng/ml CTGF+ 10 μg/ml P1F6,培养72 h.(2)实时荧光定量RT-PCR检测CTGF、P1F6对Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达的影响.(3)采用蛋白质印迹检测P1F6、CTGF对CollagenⅢ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达变化的影响.结果 (1)免疫组织化学染色显示,α-SMA染色阳性细胞大于95%,表明其为PASMC.(2)RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,CT-GF作用于PASMC 72 h,CTGF能显著促进Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达(P<0.05);使用P1F