目的 探讨线粒体泛素连接酶膜相关环指蛋白5(MARCH5)对心肌细胞缺氧/复氧损伤所致心肌细胞凋亡及线粒体形态和功能的影响及其潜在机制.方法 培养大鼠心肌细胞系H9C2细胞,分为4组:(1)正常(normal,N)组,予以常规培养;(2)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)组,予以缺氧6h/复氧12h处理;(3)H/R+阴性对照(negative control,NC)腺病毒干预(H/R+NC)组,在H/R模型基础上予以阴性对照腺病毒感染处理;(4)H/R+MARCH5过表达腺病毒干预(H/R+MARCH5)组,在H/R模型基础上予以MARCH5过表达腺病毒感染处理.通过蛋白质免疫印迹法(western blot)检测MARCH5蛋白、线粒体融合蛋白(mitofusin,Mfn)1、Mfn2、动力相关蛋白1(dyna-min-related protein 1,Drp1)、线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission protein 1,Fis1)和低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)的表达,利用MitoTracker和MitoSOX荧光染色观察线粒体形态学和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成,分别采用流式细胞术、细胞活力(cell count-ing kit-8,CCK-8)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)检测试剂盒测量细胞凋亡指数、活力和ATP水平.结果 与N组细胞相比,H/R组和H/R+NC组细胞MARCH5、Mfn1和Mfn2表达减少,Drp1、Fis1和HIF-1α表达增
作者:王霞;朱伟;熊英;赖红梅
来源:新疆医科大学学报 2021 年 44卷 11期