为克隆马铃薯晚疫病抗性相关基因,深入研究马铃薯晚疫病抗性机制,应用SMART LD-PCR技术,以晚疫病菌混合小种诱导48 h的水平抗性马铃薯(Solanum tuberosum L.)(R-gene-free)叶片为材料,构建了一个富集晚疫病抗性相关基因的cDNA文库.为提高克隆全长cDNA的效率,将cDNA文库与RACE技术结合,依据本实验室得到的病原诱导表达片段测序结果,在其内部设计两个特异引物,与文库载体臂上的通用引物配对,以文库噬菌体DNA为模板,用高保真PCR分别扩增出cDNA 5′端与3′端,从而简便、快捷地得到全长cDNA序列.采用此方法,在马铃薯中克隆了一个受晚疫病菌诱导表达的cDNA,该cDNA长904 bp,5′端有29 bp的非翻译区,3′端具有完整的polyA尾,包含一个678 bp的完整开放阅读框架,编码226个氨基酸(GenBank登录号:AY 185207).BLAST检索发现其氨基酸序列与烟草一个新的病程相关蛋白基因NtPRp27具有90
作者：田振东；柳俊；谢从华
来源：遗传学报 2003 年 30卷 11期
