从已获得的运用抑制消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离、克隆和筛选代表8-细胞早期胚胎和紧密化8-细胞胚胎差别表达基因的ESTs片段(GenBank登录号:BQ740263、BQ740251)入手,经比较二者的同源性发现这两个EST末端反向互补,拼接成一个cDNA片段,经分析此序列包含一个完整的阅读框,提交给GenBank,登录号为AY134859 .根据此序列设计引物从小鼠8-细胞紧密化胚胎cDNA中经PCR扩增出目的片段,克隆入pUCm-T载体后测序而获得全长cDNA,为小鼠植入前胚胎紧密化相关基因Crg1,分析比较证明Crg1基因与AY134859基本吻合.Crg1基因的cDNA全长为810 bp,只有一个外显子,编码由150个氨基酸组成,分子量理论值为17.67 kD的蛋白质.与最新的小鼠基因组工作草图进行电子杂交,该基因被定位在小鼠的14号染色体上.RT-PCR实验证明在小鼠植入前各个时期的胚胎、小鼠胚胎干细胞中均有表达,在小鼠胚胎成纤维细胞中没有表达.半定量RT-PCR实验证明Crg1基因在紧密化胚胎中表达较8-细胞胚胎高.采用Northern-blot手段分析Crg1基因在成年小鼠的8种组织中的表达情况,结果表明该基因只在小鼠卵巢中有微弱的表达,转录本大小为1.2 kb,而在成年小鼠的脑、心脏、肾、睾丸、肝脏、肺、脾等中没有表达.研究表明,Crg1基因可能与
作者：李汶；卢光琇
来源：遗传学报 2004 年 31卷 3期
