氨甲蝶呤(MTX)是一种重要的常用化疗药物,然而由于肿瘤细胞对其耐药性的增强而经常导致其疗效大大降低.为了寻找并鉴定与MTX耐药性相关的蛋白质从而为进一步阐明MTX的耐药机制提供线索,培养来源于小鼠NIH3T3的小鼠胚胎成纤维细胞系3T3R500与其耐300μmol/L MTX的细胞系MTX300,提取上述两种细胞系的总蛋白质,双向凝胶电泳分离蛋白质组成分,扫描并通过软件分析考马斯亮蓝染色的2-DE凝胶,选取表达差异最显著的点,胶内酶切后MALDI-TOF-MS进行肽指纹图谱(PMF)鉴定.图像分析显示,实验组和对照组的蛋白质组图谱之间,一些蛋白质点的表达有明显的变化.通过MALDI-TOF-MS和数据库查询,成功鉴定了耐药后表达变化最显著的蛋白质点为二氢叶酸还原酶(DHFR),并通过Western blot验证了该结果,提示DHFR在MTX耐药机制中发挥重要作用.
作者：冯源熙；白静；张春玉；傅松滨
来源：遗传学报 2006 年 33卷 5期
