目的以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)作为标记基因,观察腺相关病毒(AAV)载体介导视网膜基因转移作用,为视网膜疾病的基因治疗打下基础.方法制备重组腺相关病毒rAAV-gfp;将纯化的rAAV-gfp病毒10μL (10×1012TU*L-1)分别注射于青紫兰灰兔及日本大耳白兔视网膜下,于一定时间内取眼球或用眼底照相机进行观察.结果注射rAAV-gfp后未见兔眼术后细菌感染及明显免疫反应,在荧光显微镜下观察GFP表达情况,3周时可见明显的绿色荧光分布于RPE细胞层,5、6周荧光强度比3周增强,荧光范围也有所扩大.直至10周荧光范围进一步扩大,强度更强.眼底照相机观察显示,最早4周观察到眼底GFP表达,至7个月(观察仍在继续)仍然维持在高水平.结论视网膜下注射rAAV-gfp病毒可在RPE细胞内稳定表达报告基因gfp;AAV载体可望用于视网膜疾病的基因治疗.
作者：单清；张杰；任华；王登龙；伊洪涛；吴小兵；钱焕文
来源：眼科新进展 2001 年 21卷 4期
