目的克隆人MRG15(MORF4-related gene on chromosome 15)的编码基因,构建荧光表达载体,并检测其在培养人晶状体上皮细胞中的表达,为研究MRG15与年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)的相关性奠定基础.方法用RT-PCR的方法从人ARC的晶状体前囊膜中扩增MRG15的编码基因,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至荧光真核表达载体pEGFP-N2中,酶切鉴定正确后采用脂质体法,瞬时转染培养人晶状体上皮细胞,荧光显微镜下检测MRG15-pEGFP-N2的定位.结果测序证实,从人ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15 编码基因的序列及读框全部正确.重组质粒MRG15-pEGFP-N2经酶切后产生与理论预期长度相符的片段.脂质体法转染后24 h,观察到其主要在培养人晶状体上皮细胞的细胞核中表达.结论克隆了人MRG15的编码基因,成功构建了荧光真核表达载体MRG15-pEGFP-N2,并可在培养人晶状体上皮细胞中表达.
作者：张自峰；周健；惠延年；张健；刘燕；刘新平；药立波；王雨生
来源：眼科新进展 2005 年 25卷 3期
