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背景 人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)在体外能诱导分化为多种体细胞,但目前有关hAMSCs分化为眼表细胞的研究鲜有报道. 目的 探讨体外共培养诱导hAMSCs向眼表细胞分化的可能性及其分化机制.方法 本研究经广州医科大学第二附属医院伦理委员会批准,在健康产妇的知情同意下从人胎盘中分离hAMSCs并进行培养,采用流式细胞术计数分析CD44、CD45、CD73、CD90在培养细胞中的表达以鉴定细胞,此外通过成骨诱导分化实验和成脂诱导分化实验对培养细胞进行体外分化鉴定.在患者知情同意下获取眼科手术中弃用的人眼球结膜组织,用组织块培养法分离和培养人球结膜成纤维细胞(hBCFs),将hAMSCs与hBCFs在Transwell培养体系中进行共培养,分为hAMSCs培养组和hAMSCs与hBCFs共培养组,用含质量分数5%胎牛血清(FBS)的DMEM高糖/F12培养基培养7d,采用免疫荧光技术检测hAMSCs中对上皮细胞角蛋白19(CK19)的表达,评价hAMSCs向眼表细胞分化的程度,并检测hAMSCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,评价其分化过程与间质上皮化转换(MET)过程的关系.结果 传代至3~7代的hAMSCs均为细长形,但随着传代增加,细胞体积增大,细胞中CD44、CD73、CD90表达呈强阳性,但不表达CD45.经成骨或成脂诱导分化后3~4周,细胞中茜素红S(ARS)染色或油红O染色阳性.hAM

作者:文晔;沙翔垠;宋莉;刘志平;彭娟;谢莉菲

来源:中华实验眼科杂志 2014 年 32卷 9期

知识库介绍

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作者:
文晔;沙翔垠;宋莉;刘志平;彭娟;谢莉菲
来源:
中华实验眼科杂志 2014 年 32卷 9期
标签:
人羊膜间充质干细胞 共培养 诱导 分化 眼表细胞 Human amnion mesenchymal stem cell Co-culture Induce Differentiation Ocular surface cell
背景 人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)在体外能诱导分化为多种体细胞,但目前有关hAMSCs分化为眼表细胞的研究鲜有报道. 目的 探讨体外共培养诱导hAMSCs向眼表细胞分化的可能性及其分化机制.方法 本研究经广州医科大学第二附属医院伦理委员会批准,在健康产妇的知情同意下从人胎盘中分离hAMSCs并进行培养,采用流式细胞术计数分析CD44、CD45、CD73、CD90在培养细胞中的表达以鉴定细胞,此外通过成骨诱导分化实验和成脂诱导分化实验对培养细胞进行体外分化鉴定.在患者知情同意下获取眼科手术中弃用的人眼球结膜组织,用组织块培养法分离和培养人球结膜成纤维细胞(hBCFs),将hAMSCs与hBCFs在Transwell培养体系中进行共培养,分为hAMSCs培养组和hAMSCs与hBCFs共培养组,用含质量分数5%胎牛血清(FBS)的DMEM高糖/F12培养基培养7d,采用免疫荧光技术检测hAMSCs中对上皮细胞角蛋白19(CK19)的表达,评价hAMSCs向眼表细胞分化的程度,并检测hAMSCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,评价其分化过程与间质上皮化转换(MET)过程的关系.结果 传代至3~7代的hAMSCs均为细长形,但随着传代增加,细胞体积增大,细胞中CD44、CD73、CD90表达呈强阳性,但不表达CD45.经成骨或成脂诱导分化后3~4周,细胞中茜素红S(ARS)染色或油红O染色阳性.hAM