背景 目前抗VEGF药物的应用已广泛用于眼部新生血管性疾病发病的治疗,但有部分患者的疗效并不理想,因此研究VEGF的上游基因缺氧诱导因子-1(HIF-1)及其限速酶脯氨酸羟化酶(PHDs)在新生血管形成中的作用具有重要的临床意义. 目的 探讨外源性PHDs在HIF-1激活通路中的负性调节作用.方法用Hela细胞提取RNA,采用逆转录PCR法从cDNA克隆PHD1、PHD2和PHD3,通过限制性内切酶构建pFLAG-PHD1、pFLAG-PHD2和pFLAG-PHD3质粒并通过基因测序进行鉴定.分别将人RPE细胞株(ARPE-19)在体积分数21％ O2(常氧组)、1％ O2(低氧组)和缺氧模拟剂(CoCl2,缺氧组)条件下进行培养,将pFLAG-PHD1、pFLAG-PHD2和pFLAG-PHD3质粒分别转染至培养的ARPE-19细胞中,pFLAG-CMV2转染作为空白对照.采用Western blot法测定和比较转染细胞在不同氧环境培养下PHD1、PHD2和PHD3蛋白的表达强度;采用双荧光素酶报告系统评估各组细胞中HIF-1的转录活性. 结果 Western blot法检测显示常氧组、低氧组和缺氧组ARPE-19细胞中均有PHD1、PHD2和PHD3蛋白的表达,各组细胞中PHD2的表达条带均强于PHD1和PHD3蛋白,差异均有统计学意义(P＜0.05).pFLAG-CMX转染后常氧组细胞中内源性HIF-1活性反应低,低氧组和缺氧组细胞中HIF-1的转录活性明显升高,与空白对照组相比,pFLAG

作者：马昱；唐少华；姜燕荣；石璇

来源：中华实验眼科杂志 2016 年 34卷 3期