目的 观察1型糖尿病大鼠视网膜组织内皮黏蛋白(EMCN)表达变化,探讨其通过活化蛋白激酶B(Akt)对1型糖尿病模型大鼠神经元的保护机制.方法 采用随机数字表法将健康清洁级SD大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、EMCN转染组和mCherry转染组4个组,每组14只,造模前2周玻璃体腔内注射生理盐水、腺相关病毒(AAV)、AAV-EMCN或AAV-mCherry,分别收集造模后4周和8周视网膜组织蛋白样本.采用Western blot法检测各组大鼠EMCN的表达;利用视网膜铺片观察AAV对造模后8周大鼠视网膜的转染效率;采用苏木精-伊红染色观察造模后8周各组大鼠视网膜组织形态结构变化;采用免疫荧光染色检测造模后8周各组大鼠视网膜组织细胞中cleaved caspase-3阳性细胞情况;采用TUNEL法观察各组大鼠造模后8周视网膜组织凋亡细胞情况;采用Western blot法检测造模后8周各组大鼠视网膜组织中Akt磷酸化比例. 结果糖尿病模型组、EMCN转染组和mCherry转染组大鼠空腹血糖(FPG)均较对应时间点正常对照组高,差异均有统计学意义(均P＜0.001).糖尿病模型组大鼠造模后4周、8周视网膜组织中EMCN表达量均低于正常对照组,差异均有统计学意义(t=3.71,P＜0.05;t=10.09,P＜0.001).造模后8周,mCherry转染组大鼠视网膜铺片间可见大量红色荧光,表明AAV转染视网膜细胞成功
作者：牛田；谢莉萍；邢馨丹；蒋炎；金慧昳；王海燕；刘堃
来源：中华实验眼科杂志 2018 年 36卷 6期
