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目的 本研究探讨成骨细胞分泌的白介素-7(IL-7)通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号来调节骨形成.方法 将IL-7基因的编码框构建于慢病毒表达载体,导入MC3T3-E1成骨细胞中,应用qRT-PCR和ELISA方法检测IL-7基因mRNA和蛋白的表达效率.Western blot方法检测MC3T3-E1细胞P-S6、S6、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)以及骨钙素(osteocalcin,Ocn)表达情况.用0.1nmol/L mTORC1特异性抑制剂雷帕霉素刺激过表达IL-7基因的MC3T3-E1成骨细胞,Western blot方法检测P-S6、S6、Col Ⅰ以及Ocn表达情况.结果 过表达IL-7基因的慢病毒载体感染MC3T3-E1细胞可使其IL-7 mRNA表达上调4.6倍,ELISA从蛋白水平证实过表达组细胞上清的IL-7含量增加3.9倍;过表达IL-7的MC3T3-E1细胞P-S6蛋白表达显著增强,而Col Ⅰ和Ocn蛋白表达显著降低;雷帕霉素处理IL-7过表达的MC3T3-E1细胞导致其P-S6蛋白表达显著降低,而Col Ⅰ和Ocn蛋白表达上调.结论 成骨细胞来源的IL-7通过促进mTORC1信号通路抑制其发育成熟.

作者:王华磊

来源:医学研究杂志 2017 年 46卷 12期

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作者:
王华磊
来源:
医学研究杂志 2017 年 46卷 12期
标签:
成骨细胞 白介素-7 mTOR 骨形成 Osteoblast Interleukin-7 mTOR Bone formation
目的 本研究探讨成骨细胞分泌的白介素-7(IL-7)通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号来调节骨形成.方法 将IL-7基因的编码框构建于慢病毒表达载体,导入MC3T3-E1成骨细胞中,应用qRT-PCR和ELISA方法检测IL-7基因mRNA和蛋白的表达效率.Western blot方法检测MC3T3-E1细胞P-S6、S6、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)以及骨钙素(osteocalcin,Ocn)表达情况.用0.1nmol/L mTORC1特异性抑制剂雷帕霉素刺激过表达IL-7基因的MC3T3-E1成骨细胞,Western blot方法检测P-S6、S6、Col Ⅰ以及Ocn表达情况.结果 过表达IL-7基因的慢病毒载体感染MC3T3-E1细胞可使其IL-7 mRNA表达上调4.6倍,ELISA从蛋白水平证实过表达组细胞上清的IL-7含量增加3.9倍;过表达IL-7的MC3T3-E1细胞P-S6蛋白表达显著增强,而Col Ⅰ和Ocn蛋白表达显著降低;雷帕霉素处理IL-7过表达的MC3T3-E1细胞导致其P-S6蛋白表达显著降低,而Col Ⅰ和Ocn蛋白表达上调.结论 成骨细胞来源的IL-7通过促进mTORC1信号通路抑制其发育成熟.