目的 建立基于微滴式数字PCR(ddPCR)技术定量检测血浆游离DNA(cf-DNA)含量的方法,并探讨其在结直肠癌诊疗中的应用价值.方法 设计β-actin特异性引物和探针,建立ddPCR检测cf-DNA绝对定量方法,根据不同浓度标准品验证该检测方法的敏感度、线性以及重复性.该法检测68例结直肠癌患者、33例结直肠良性肿瘤患者及60例健康对照者血浆cf-DNA水平,化学发光法检测其血清CEA、CA19-9水平,分析血浆cf-DNA水平与临床病理参数及血清CEA、CA19-9水平的关系,并用ROC曲线评估其诊断效能.结果 本实验所建立的ddPCR方法能够检测低至10pg/μl的微量DNA模板,检测敏感度为0.29 copies/μl;且在模板浓度为10pg/μl ～ 10ng/μl的范围内线性良好(Y=-2.34 +33.17X,R2=0.999);批内CV为9.85％,批间CV为11.04％.该法检测结直肠癌组、结直肠良性肿瘤组和健康对照组血浆cf-DNA水平分别为6700(3800～9925)、3100(2300 ～4000)、2500(1775 ～ 4000) copies/ml,结直肠癌组血浆cf-DNA水平显著高于结直肠良性肿瘤组(P=0.000)和健康对照组(P=0.000),而结直肠良性肿瘤组与健康对照组比较,差异无统计学意义(P=0.167).结直肠癌患者血浆cf-DNA水平在不同年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、淋巴结转移以及肿瘤浸润程度间比较,差异均无统计学意义(P

作者：A0010949199；A000052506；A007155292；A006987236；A0011089495；A006090230

来源：医学研究杂志 2018 年 47卷 6期