目的 探讨微小RNA-130b(microRNAs-130b,miR-130b)在胶质瘤细胞中的表达以及调控体外胶质瘤细胞血管生长的作用.方法 利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测miR-130b在胶质瘤细胞株U251、SHG-44和U87及人正常星形胶质细胞株NHA中转录水平的表达.使用miR-130b模拟物(miR-130b mimics)或miR-130b抑制剂(miR-130b inhibitor)瞬时转染体外胶质瘤细胞.提取胶质瘤细胞的条件培养基(conditioned medium,CM),酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测CM中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth fac-tor-A,VEGFA)的表达.CM作用人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)后,Transwell小室实验检测体外HUVECs运动能力.小管形成实验检测HUVECs诱导血管新生的能力.通过生物信息学工具分析miR-130b可能靶基因,荧光素酶报告实验测定荧光素酶活性.凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测核因子-κB(nucle-ar factor-κB,NF-κB)活性.Western blot法测定肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和VEGFA蛋白在胶质瘤细胞中的表达水平.结果 NHA细胞中miR-130b的表达水平分别为U251、SHG-44和U87细
作者:张静;周永刚;舒俊斌;李晓波;吕晓俊;叶汝勇;李正在
来源:医学研究杂志 2020 年 49卷 5期