目的 构建Ku70蛋白酵母双杂交诱饵载体,为研究Ku70及其相互作用蛋白在乳腺癌中的作用机制奠定基础.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人宫颈癌HeLa细胞株扩增出Ku70 cDNA全长片段,用Sal Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切Ku70 cDNA片段后定向克隆到真核细胞表达载体pGBKT7,获得诱饵质粒pGBKT7-Ku70,经限制性内切酶酶切和测序鉴定后转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-Ku70的自激活作用,同时利用蛋白质免疫印迹检测诱饵蛋白Ku70的表达.结果 Ku70 cDNA正确克隆到载体pGBKT7,转化到酵母菌株AH109中的诱饵载体pGBKT7-Ku70经表型筛选证实无自激活作用,蛋白质免疫印迹检测显示pGBKT7-Ku70在酵母细胞中稳定表达诱饵蛋白Ku70.结论 成功构建了Ku70蛋白酵母双杂交诱饵载体,并且在酵母菌株AH109中稳定表达.
作者：李郝；唐玉萍
来源：医学综述 2013 年 19卷 22期
