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目的 探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下,对破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用,并研究其可能机制.方法 构建DEPTOR shRNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞.通过Western blot技术从蛋白水平检测RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL的表达.Western blot检测自噬相关蛋白LC-3和Atg5表达.构建共培养体系,分三组:THP-1细胞单培养组、THP-1+RPMI-8226细胞组和THP-1+DEPTOR shRNA组.应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测THP-1向破骨样细胞分化过程中抗酒石酸酸性磷酸酶活性改变,应用RT-PCR法检测THP-1细胞降钙素受体(CTR)和组织蛋白酶(Cathepsin)-K mRNA表达水平.结果 DEPTOR shRNA可明显抑制RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL蛋白表达(P<0.05),DEPTOR shRNA组自噬相关蛋白LC-3和Atg5的蛋白的表达水平较阴性对照转染组及未转染组下降(P<0.05).THP-1细胞与RPMI-8226细胞共培养条件下可诱导THP-1细胞破骨样分化,CTR和Cathepsin-K基因表达上调(P<0.05);DEPTOR shRNA共培养条件下可抑制THP-1细胞向破骨样细胞分化,CTR和Cathepsin-K基因表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DEPTOR shRNA能明显抑制共培养体系中THP-1细胞的破骨样分化,该作用可能与DEPTOR下调RPMI-8226细胞RANKL有关,抑制自噬可阻碍破骨细胞的分化成熟.

作者:张浩然;乔旭旭;毕明宏;翟云芝;钱立宇;潘成武;赵论

来源:中国医药导报 2018 年 15卷 04 期

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