目的:利用细菌内同源重组快速构建重组腺病毒质粒和制备重组腺病毒.方法:制备感受态BJ5183,将pAdEasy-1转化BJ5183,制备含pAdEasy-1的BJ5183感受态,将线性化的pShuttle-CMV-LacZ转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态菌.采用细菌中同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-LacZ.pAdEasy-1-LacZ用PacⅠ线性化后,再用LipoVec介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsCl密度梯度离心法纯化重组腺病毒AdEasy-1-LacZ.采用X-gal染色观察LipoVec介导的重组腺病毒质粒的转染效果及病毒包装情况.将纯化的AdEasy-1-LacZ转染HVSMC,X-gal染色观察基因转染效率及基因表达情况.结果:pShuttle-CMV-LacZ成功地转化了含pAdEasy-1的BJ5183,并在其内发生了同源重组.X-gal染色证实了pAdEasy-1-LacZ转染AD293后,产生了重组腺病毒AdEasy-1-LacZ.病毒滴度为3.9×1012pfu/ml.AdEasy-1-LacZ转染HVSMC后,β-gal在HVSMC中得到了有效表达.结论:细菌内同源重组法是一种快速构建重组腺病毒质粒的方法, AdEasy-1-LacZ的制备为基因治疗研究提供了一良好对照载体.
作者：王家宁；黄永章；孔霞；郭凌郧
来源：郧阳医学院学报 2004 年 23卷 1期
