目的:利用细菌内同源重组法构建和制备含人基质细胞源衍生因子-1α(hSDF-1α)重组腺病毒质粒. 方法:设计5' 端分别具有EcoR V/Xho Ⅰ酶切位点的扩增hSDF-1α cDNA片段上下游引物,聚合酶链反应法(PCR)从pORF-hSDF-1α质粒中扩增hSDF-1α的cDNA,插入pGEM-T Easy 载体中,构建pGEM-T-hSDF-1α质粒,EcoR V/Xho Ⅰ双酶切后回收279 bp片段,与经过相同酶切的8.8 kb pShuttle-IRES-hrGFP-2进行连接,连接产物转化感受态DH5 α,挑选克隆,重组质粒pShuttle-EGFP-hSDF-1α用EcoR V/ Xho Ⅰ酶切鉴定.pShuttle-EGFP-hSDF-1α经Pme Ⅰ酶切线性化后,转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183,采用细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAd-EGFP-hSDF-1α; pAd-EGFP-hSDF-1α质粒经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定.结果:线性化的pShuttle-EGFP-hSDF-1α转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183, 重组质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5 kb的片段,PCR反应扩增出了279 bp的片段.结论:用细菌内同源重组成功地构建了含hSDF-1α cDNA的重组腺病毒质粒,为进行表达hSDF-1α的重组腺病毒的制备及hSDF-1α在骨髓源干细胞动员迁移中的作用研究奠定了基础.
作者：唐俊明；黄永章；郭凌郧；潘国栋；孔霞；杨建业；王家宁
来源：郧阳医学院学报 2006 年 25卷 4期
