目的:构建针对Skp2的siRNA腺病毒载体.方法:合成针对Skp2的siRNA靶DNA序列及相应阴性对照序列,退火成DNA双链,然后亚克隆穿梭质粒pShuttle-H1,Pne I线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染AD293细胞,包装得到pAd-Skp2-siRNA和pAd-Skp2-siRNA-NC重组腺病毒.用病毒体外感染结肠癌SW480细胞,Western blot检测Skp2蛋白表达水平.结果:重组腺病毒载体经酶切、鉴定正确,制备的病毒感染效率高,能显著抑制Skp2蛋白表达.结论:细菌内同源重组成功构建了Ad-Skp2-siRNA重组腺病毒及阴性对照病毒.
作者：魏刚；孙泽群；孔霞；黄永章；王斌；唐俊明；徐少勇
来源：湖北医药学院学报 2011 年 30卷 2期
