目的:构建靶向人RIP的小分子干扰RNA(siRNA)真核表达载体(pSUPERpuro-RIP),在Huh7细胞系中瞬时表达后,检测其对RIP的沉默效果.方法:设计4对含RIP mRNA特异性序列的60 nt DNA链,通过基因克隆技术将其插入真核表达载体pSUPER-puro,构建重组pSUERpuro-RIP siRNA载体,以EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切及测序验证其正确性.再瞬时转染Huh7细胞,Western blot检测RIP蛋白表达.结果:酶切测序证实载体构建成功,无碱基突变.Western blot结果表明pSUPERpuro-RIP siRNA在Huh7细胞系中有较好的沉默效果.结论:成功构建了靶向人RIP基因的siRNA载体pSUPERpuro-RIP siRNA.
作者：吴鹏；孙竞；李晓强；龚克
来源：湖北医药学院学报 2011 年 30卷 2期
