目的 探讨眼镜蛇毒细胞毒素CTX-d诱导NB细胞凋亡的机制.方法 MTT法测定CTX-d体外细胞毒作用,电镜、流式细胞仪观察CTX-d对NB4细胞的诱导凋亡作用,流式细胞仪检测NB4细胞线粒体膜电位的变化,Western-blotting测定胞浆细胞色素C及caspase-9、caspase-3的变化.结果 CTX-d作用NB4细胞6、12 h的IC50分别为1.8、1.35 μg/mL;CTX-d引起NB4细胞线粒体肿胀、核固缩等形态学改变;诱导NB4细胞出现亚G1期的凋亡峰,且有时效及量效关系;CTX-d(1.0 μg/mL)作用0.5 h,NB4细胞线粒体膜电位已开始下降,同时在胞浆中检测到细胞色素C,显示细胞色素C已由线粒体释放入胞浆;caspase-9酶原的量在CTX-d(1.0 μg/mL)作用1 h时开始下降,而活化的caspase-3片断在0.5 h即检测到,表明除了通过caspase-9,CTX-d还可能通过其他途径激活caspase-3.结论 CTX-d可通过降低线粒体膜电位、细胞色素C释放,激活caspase-9和caspase-3,从而诱导NB4细胞凋亡,还可能通过其他途径激活caspase-3,参与凋亡作用.
作者：陈纯；陈崇宏
来源：中草药 2007 年 38卷 12期
