背景与目的:survivin是一种重要的抗凋亡基因,在肿瘤组织中特异性高表达,并参与调控细胞周期和细胞凋亡,其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切.但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少.课题组前期研究成功构建含有survivin核心启动子的荧光报告载体pGL3-SVP230-1uc,并发现核心启动子区存在缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 α,HIF-1 α)的潜在位点.本研究拟通过免疫荧光双标记法、电泳迁移率实验(EMSA)、共转染等方法探讨缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549中HIF-1 α调控survivin转录的确切机制.方法:(1)运用免疫荧光双标记检测缺氧A549细胞中HIF-1 α与survivin的表达；(2)HIF-1α表达质粒和HIF-1α siRNA分别转染A549细胞,30 h后RT-PCR、Western blot和免疫荧光双标法检测survivin mRNA和蛋白表达；(3)pGL3-SVP230-luc(含有survivin核心启动子的荧光报告载体)与HIF-1 α表达质粒和HIF-1α siRNA分别共转染A549细胞,测定萤光素酶的表达活性；(4)EMSA分析HIF-1 α与survivin核心启动子结合情况；(5)流式细胞术和MTT法检测细胞凋亡和增殖.结果:(1)HIF-1 α与survivin共表达于A549细胞中；(2)转染HIF-1α表达质粒组survivin mRNA和蛋白表达水平显著上调,转染HIF-1 α siRNA组sur

作者：李伟；陈余清；孙艳；赵成岭；王效静

来源：中国癌症杂志 2011 年 21卷 6期