背景与目的：原癌基因Bmi-1是多梳基因家族中的一员，能调节正常干细胞和肿瘤干细胞的自我更新能力。近年来发现其在多种恶性肿瘤中表达上调。本文旨在观察Bmi-1基因沉默对肺腺癌A549细胞体内外增殖的影响，并初步探讨其机制。方法：根据本实验室设计的4条针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列，选择一条已经证实最有效的序列作为靶序列和一条随机序列作为阴性对照，构建重组逆转录病毒siRNA表达载体并将其转染入A549细胞中；应用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测对Bmi-1基因的沉默效果；应用MTT比色法、台盼蓝拒染法及平板克隆形成实验检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外增殖的影响；利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期；通过裸鼠腋窝皮下接种各组细胞，观察Bmi-1-siRNA对A549细胞在裸鼠体内的致瘤能力的影响；Western blot检测PTEN、p-AKT、cyclin D1、P21、P27蛋白表达。结果：Bmi-1-siRNA有效地沉默了Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达；沉默Bmi-1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外增殖能力，使干扰组细胞的细胞周期阻滞于G1期；沉默Bmi-1基因的表达后，干扰组细胞中PTEN、P21、P27蛋白增加，p-AKT、cyclin D1蛋白表达降低。结论：Bmi-1-siRNA通过使细胞周期阻滞于G1期来抑制肺腺癌A549的体内外增殖能力
作者：郑翔宇；朱杰；王艺芳；刘纯青；刘奔；杨春辉；刘丹丹；孟秀香
来源：中国癌症杂志 2013 年 7期
