背景与目的：Apollon基因在白血病等多种肿瘤内高表达。本试验通过构建高效干扰Apollon基因的短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)真核表达载体，探讨RNA干扰技术能否逆转人髓系白血病K562细胞多药耐药。方法：构建靶向Apollon基因真核表达载体pGPHI-GFP-Neo-Apollon，应用LipofectamineTM2000转染K562细胞，G418稳定筛选。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、细胞免疫荧光法分别检测重组载体稳定转染K562细胞后Apollon mRNA及蛋白的表达情况；四甲基偶氮唑盐(MTT)、流式细胞术检测细胞转染前后对长春新碱(leurocristine，VCR)、足叶乙苷(etoposide，VP16)的敏感性及凋亡率的变化。结果：成功构建了pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体并在K562细胞内稳定表达的细胞克隆，经G418筛选后，重组载体能有效沉默Apollon的表达，Apollon mRNA及蛋白表达水平明显下降。MTT结果显示，基因干扰组细胞对VCR、VP16的敏感性明显增强，其半数抑制浓度(half-inhibitory，IC50)值分别为(0.144±0.018)mg/L、(17.336±3.571) mg/L，明显低于细胞对照组(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明，基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著升高(P<0.05)，而转染阴性对照组细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：p

作者：贾秀红；孝飞飞；李建厂

来源：中国癌症杂志 2013 年 9期