目的:实现含人类胰岛素生长因子Ⅰ(hIGF-1)融合蛋白的高水平可溶性表达和纯化,应用factor Xa获得非融合的hIGF-1,并对提高目的融合蛋白对factor Xa的敏感性进行探索.方法:根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成编码70个氨基酸的hIGF-1基因,克隆到表达载体pET-35b(+),实现hIGF-1与纤维素结合域(cellulosebinding domain,CBD)的融合表达,并在两者之间引入factor Xa的识别位点,同时尝试在factor Xa识别位点前引入7个氨基酸的柔性短肽(Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly),比较factor Xa酶切效率.纤维素亲和层析纯化融合蛋白CBD-IGF,经Western blotting检测后,利用MTT法测定其促进NIH3T3细胞增殖的活性.结果:可溶性融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中高效表达;活性测定结果显示所纯化的融合蛋白具有促进3T3细胞增殖的活性.在factor Xa识别位点前引入柔性短肽后提高了融合蛋白对factor Xa的敏感性.结论:实现有活性的融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中可溶性的高效表达,为高效制备hIGF-1基因工程产品奠定了基础.此外,在factor Xa识别位点前引入柔性短肽有效提高融合蛋白CBD-IGF对factor Xa的敏感性.
作者：高媛；余榕捷；洪岸；李志英
来源：中国病理生理杂志 2005 年 21卷 2期
