目的:构建反义VEGF基因真核表达载体,研究其对肾癌细胞VEGF表达的影响.方法:克隆人VEGF基因,将反义VEGF基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)真核表达载体,酶切鉴定;转染人肾癌细胞,G418筛选阳性克隆.RT-PCR方法检测VEGFmRNA的表达,免疫组化法检测VEGF基因的蛋白表达,MTT法测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期.结果:成功构建反义VEGF基因真核表达载体;反义VEGF组VEGFmRNA的表达受到抑制,明显低于空载体组和对照组VEGFmRNA的表达,空载体组VEGFmRNA的表达没有受到影响;反义VEGF组的VEGF蛋白表达明显低于空载体组和对照组,空载体组和对照组VEGF蛋白的表达无显著差异;反义VEGF组细胞生长减慢,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少.结论:人反义VEGF基因可明显降低肾癌细胞VEGF基因在转录和翻译水平的表达,抑制肾癌细胞生长,为肾癌基因治疗提供一定的实验依据.
作者：潘周辉；陈昭典；杨太森
来源：中国病理生理杂志 2005 年 21卷 12期
