目的:探讨用重组PCR技术对人单核细胞趋化蛋白-1(hμMCP-1)基因cDNA进行缺失突变,构建N末端缺失7个氨基酸的编码序列hμMCP-1突变体-hμMCP-1(7ND)cDNA,以期实现7ND基因治疗抑制MCP-1活性.方法:根据缺失前后的两段基因片段A和B分别设计两对引物即内引物与外引物,第一轮PCR反应通过每段各自的内外引物,分别获得加有互补末端的A+和B+DNA片段.然后进行第二轮PCR反应,以第一轮PCR产物为模板,加入两外引物,获得大量重组体AB基因片段,将PCR产物与T载体连接,进行酶切鉴定并测序证实成功进行了hμMCP-1的基因改造.为便于表达hμMCP-1突变体,通过EcoRⅠ/HindⅢ酶切,将目的基因克隆入pcDNA3.1真核表达载体中.结果:经酶切鉴定并测序,表明已成功地构建了hμMCP-1cDNA突变体-7ND的真核细胞表达载体.结论:已成功进行了hμMCP-1基因cDNA的缺失突变,获得了7ND cDNA的克隆,为进一步研究hμMCP-1功能奠定了基础.
作者：仲琳；张运；张梅；季哓平；陈文强；李大庆；张岩；张冰；杨军；刘少荣
来源：中国病理生理杂志 2005 年 21卷 12期
