目的:构建信号肽-canstatin真核表达载体并在人食管癌细胞Eca-109中分泌表达.方法:利用点突变技术将小鼠纤溶酶原信号肽(SP)序列插入到载体pEGFP-C1 EGFP编码序列起始密码的后面,构建pEGFP-C1-SP载体.以pMD18T-Can为模板,扩增小鼠canstatin基因,构建信号肽-canstatin分泌型真核表达载体pEGFP-C1-SP-Can.用脂质体转染法瞬时转染人食管癌细胞Eca-109.利用Western blotting检测小鼠canstatin融合蛋白在Eca-109细胞中的分泌表达.结果:DNA测序证明所构建的带信号肽的中间载体pEGFP-C1-SP正确;酶切和DNA测序表明信号肽-canstatin分泌型真核表达载体pEGFP-C1-SP-Can构建正确,EGFP-cansta-tin融合蛋白在人食管癌细胞Eca-109中分泌表达.结论:获得了能分泌canstatin融合蛋白的真核表达载体,并分泌到人食管癌细胞Eca-109的细胞外,为小鼠canstatin的功能研究及应用于基因治疗提供了实验基础.
作者：侯卫红；田芳；王建民；王志超；陈华艳；薛乐勋
来源：中国病理生理杂志 2006 年 22卷 10期
