目的:构建前列腺特异性表达的人前列腺特异膜抗原(PSMA)基因启动子/增强子表达载体,并进行组织特异性鉴定.方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增PSMA上游1 175 bp的启动子序列,及第三内含子中258 bp的增强子序列,将两个序列定向克隆至荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-Basic,构建前列腺特异性表达载体pGL3-PSMP-PSME.将构建载体用脂质体分别转染前列腺癌PC-3M细胞株及4种非前列腺癌细胞株,48 h后通过检测荧光素酶表达活性,确定克隆的启动子及增强子的活性及其组织特异性表达活性.结果:构建的pGL3-PSMP-PSME质粒经酶切及DNA测序分析鉴定,证实克隆片段的大小、插入方向及其序列正确.细胞转染结果显示,pGL3-PSMP-PSME在PC-3M细胞株中表达活性明显高于其它4种非前列腺癌细胞株.结论:构建的前列腺表达载体具有较高的组织特异性,为进一步研究PSMA调控序列驱动治疗基因进行前列腺癌的靶向生物治疗奠定了基础.
作者：康鲁东；吴伟芳；崔福爱；王秀利；胡晓燕；孔峰
来源：中国病理生理杂志 2007 年 23卷 1期
