目的:探讨人诱导性多能干细胞(iPS细胞)体外定向分化为神经干细胞(NSCs)的方法.方法:人iPS细胞悬浮培养4 d形成的拟胚体(EB)经维甲酸(RA)诱导4 d,诱导后的EB在无血清培养基中筛选并扩增培养.倒置显微镜下观察诱导后细胞的形态变化,RT-PCR检测iPS细胞多能性基因Nanog、Oct4和Sox2的表达,免疫荧光法检测NSCs特异性标志物Nestin、神经元标志物β-tubulinⅢ和神经胶质细胞标志物GFAP的表达.结果:(1)人iPS细胞在饲养层细胞上稳定传代,表达多能性基因Nanog、Oct4和Sox2,去除饲养层后悬浮培养能形成球形EB;(2)经RA诱导后的EB在无血清培养基中筛选培养第1 d贴壁生长,周围爬出细胞;第3 d,在高倍镜下可见中央聚集的细胞呈环形的rosette结构,rosette结构增多到第7 d达高峰.对照组未观察到rosette结构.随后大部分rosette细胞脱离瓶壁悬浮生长,形成神经球样克隆.免疫荧光显示神经球呈nestin阳性表达.贴壁培养的神经球能分化成β-tubulin Ⅲ和GFAP阳性细胞.结论:RA诱导结合无血清培养基筛选法能诱导iPS细胞高效分化为NSCs.
作者：冯年花；谢安；娄远蕾；阮琼芳；郭菲；杨阳；潘长福；邓志锋；汪泱
来源：中国病理生理杂志 2010 年 26卷 8期
