目的:通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用.方法:(1)原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.(2)利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1h、3h、6h、9h,以正常氧培养的心肌细胞作为对照.(3)用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTF检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表达情况.结果:(1)缺氧1h、3h、6h、9h后,心肌细胞凋亡率分别为(8.76±1.51)％、(15.36±2.34)％、(26.50±3.43)％、(41.96 ±4.22)％,与对照组[2.60±0.34)％]比较均有显著差异(P＜0.01);存活率分别为(93.20 ±4.12)％、(86.14±3.10)％、(75.53±7.25)％、(60.21±6.75)％,与对照组[(97.60±1.12)％]比较均有显著差异(P＜0.05).(2) ROCK-1和ROCK-2缺氧1h即开始升高,3～6h表达达高峰,9h开始回落,且均明显高于对照组(P＜0.05).(3)Caspase-3在缺氧1h开始逐渐活化,在随后观察的时点内持续处于活化状态,与对照组比较均有显著差异(P＜0.01).(4) p-PI3K在缺氧1h后开始升高,3h达高峰,6h开始回落,9h表达基本消失,各时点比较差别有统计学意义(P＜0.05).结论:ROCK-1和RO

作者：董家龙；李菊香；孙国芳；洪葵

来源：中国病理生理杂志 2014 年 30卷 11期