目的:研究细胞外半胱氨酸/胱氨酸氧化还原电位(EhCys/CySS)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝细胞线粒体功能的影响。方法:用Eh Cys/CySS分别为0 mV(氧化)、-80 mV(正常)和-150 mV(还原)的氧化还原培养基培养肝细胞株LO2并采用油酸诱导细胞建立NAFLD模型。荧光探针DCFH-DA和MitoSOX分别检测细胞整体水平和线粒体活性氧簇(ROS)生成,使用apocynin(NADPH氧化酶抑制剂)和MitoQ10(靶向线粒体抗氧化剂)、rotenone(线粒体呼吸链复合体I抑制剂)和antimycin A(线粒体呼吸链复合体Ⅲ抑制剂)作用细胞检测线粒体复合体活性从而探究ROS的来源,JC-1检测细胞线粒体膜电位。结果:油酸诱导的NAFLD细胞模型使肝细胞内ROS增多,线粒体膜电位下降;氧化的Eh Cys/CySS加剧了NAFLD肝细胞ROS的生成以及线粒体膜电位的下降,而还原的Eh Cys/CySS能清除ROS并逆转线粒体膜电位的下降。线粒体ROS清除剂MitoQ10能显著地减少氧化的Eh Cys/CySS所增加的ROS,而apocynin效果不明显。 Rotenone作用于细胞后,ROS的增长率与细胞外Eh Cys/CySS有关,氧化状态下ROS增长率最小且复合体I活性减弱,即氧化的Eh Cys/CySS能通过抑制线粒体复合体I增加ROS的生成。结论:氧化的Eh Cys/CySS能通过抑制线粒体复合体I,从
作者:官清华;丁启龙
来源:中国病理生理杂志 2015 年 7期