目的：探讨致白内障基因热休克因子4b（Hsf4b） K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白（HSP）表达的影响。方法：采用KOD－Plus－Mutagenesis－Kit试剂盒构建pWZL－blast－HA－Hsf4b／K65R赖氨酸突变质粒；通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳定表达Hsf4b／K65R突变质粒的细胞株；Western blotting 检测Hsf4b在mLEC K65R点突变细胞株和野生株中的表达；Western blotting 及real－timePCR检测K65R点突变后下游蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp27和CryAB表达的变化。结果：阳性克隆PCR及基因测序证明慢病毒载体pWZL－blast－HA－Hsf4b／K65R构建成功。 K65R点突变后不影响Hsf4b在小鼠晶状体上皮细胞mLEC中的表达，但能影响下游蛋白CryAB、Hsp27、Hsp70i和Hsp90a的表达。结论：pWZL－blast－HA－Hsf4b／K65R载体可用于慢病毒感染稳定细胞株构建。 Hsf4b K65R位点突变能显著影响其对热休克蛋白的调控功能。
作者：娄强；谢盼盼；崔秀坤；马远方；胡延忠
来源：中国病理生理杂志 2015 年 9期
