目的:利用细胞实验探讨不同高糖浓度培养H9c2细胞是否引起心肌细胞肥大,探讨Ca2+-CaN-NFAT3信号通路是否参与高糖引起H9c2心肌细胞肥厚过程。方法:体外培养H9c2大鼠心肌细胞48 h,分为5 mmol/L糖对照组、25mmol/L糖培养组、50 mmol/L糖培养组、25mmol/L糖培养加L型钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平[商品名络活喜(Norvasc)]组和50 mmol/L糖培养加Norvasc组5组。观察H9c2细胞形态并测量细胞表面积大小;荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子浓度[ Ca2+] i;ELISA测细胞内CaN浓度;real-time PCR法及Western blot检测 CaNAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达。结果:细胞大小、单细胞平均[ Ca2+] i 测定荧光值及细胞内CaN浓度在随糖浓度升高呈阶梯上升,50 mmol/L时达到最高点。加入Norvasc后细胞大小较相同条件不加Norvasc者降低。 CaNAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达随糖浓度升高逐步升高,50 mmol/L时达最高。加入Norvasc后CaNAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达均较未加Narvasc组明显降低。结论:高糖通过激活Ca2+-CaN-NFAT3信号通路引起H9c2心肌细胞肥大。
作者:徐小红;阮骆阳;田小华;潘凤娟;杨彩兰;柳国胜
来源:中国病理生理杂志 2015 年 11期