目的:探讨携带降钙素基因相关肽( CGRP)的慢病毒体外转染对大鼠c-kitpos心脏干细胞( c-kit +CSCs)活力的影响。方法:无菌条件下取出SD大鼠的心耳,采用酶消化法结合免疫磁珠法获取c-kit+CSCs,并通过流式细胞术鉴定;将携带目的基因的重组慢病毒载体( Lv-EGFP-CGRP )及空病毒载体( Lv-EGFP )分别转染至c-kit+CSCs,实验分为3组:Lv-EGFP-CGRP-CSCs组、Lv-EGFP-CSCs组和CSCs组;在荧光显微镜下观察转染情况,采用流式细胞技术测定其转染率,采用ELISA测定各组培养上清液中CGRP的浓度,采用CCK-8法检测慢病毒转染对c-kit+CSCs 活力的影响。结果:成功分离培养获取 c-kit+CSCs,流式细胞术鉴定显示其高表达 c-kit (为91.0%),低表达CD45及CD34;成功转染慢病毒的大鼠c-kit+CSCs可表达绿色荧光,48 h后可稳定表达,感染复数(MOI)值为20时,荧光显微镜观察及流式细胞术结果均显示转染率达80%以上;ELISA结果示,Lv-EGFP-CGRP-CSCs组细胞上清液CGRP分泌量较Lv-EGFP-CSCs组和CSCs组增加( P<0.01); CCK-8检测细胞活力的结果显示,慢病毒转染不影响c-kit+CSCs的活力。结论:携带CGRP的慢病毒载体可成功转染至c-kit +CSCs,转染Lv-EG-FP-CGRP后的c-kit
作者:荣季冬;李玲;龙仙萍;邓文文;石蓓
来源:中国病理生理杂志 2016 年 32卷 8期