目的:探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)调控巨噬细胞极化在磷酸钙诱导的小鼠腹主动脉瘤(AAA)形成中的作用.方法:(1)分离C57BL/6背景的Senp3flox/flox(野生型,WT)小鼠和Senp3flox/flox ;Lyz2-Cre(SENP3单核细胞特异性敲除,即条件性敲除,cKO)小鼠骨髓来源的单核细胞(BMDMs),分别诱导其M1/M2型分化,采用RT-qPCR、Western blot和细胞免疫荧光比较SENP3表达以及M1/M2型巨噬细胞分布差异.(2)8~12周龄雄性WT小鼠和cKO小鼠用改良型磷酸钙诱导14 d构建小鼠AAA模型,比较两组小鼠的成瘤率和生存率;RT-qPCR和Western blot检测SENP3、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-6及基质金属蛋白酶9(MMP-9)在两组小鼠AAA组织中的表达差异;二氢乙啶染色检测组织中活性氧簇(ROS)生成差异.(3)为探讨其中机制,通过Western blot和免疫共沉淀验证SENP3与丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)的相互作用;在BMDMs中转染Flag-MKK7野生型(Flag-MKK7 WT)和SUMO修饰位点K18突变体(Flag-MKK7 K18R mutant)后诱导BMDMs进行M1极化,用Western blot检测p-JNK和MMP-9表达的差异.结果:(1)SENP3在M1型巨噬细胞中表达显著升高(P<0. 01),在M2型巨噬细胞中显著下调(P<0. 01);SENP3在M1向M2型巨噬细胞转化过程中表达显著下降(P<0. 01),而在M2
作者:陈阳;张永兴;倪焕尔;李伟峰;汪芳
来源:中国病理生理杂志 2020 年 36卷 5期