您的账号已在其他设备登录,您当前账号已强迫下线,
如非您本人操作,建议您在会员中心进行密码修改

确定
收藏 | 浏览183 | 下载0

目的 研究microRNA-145(miR-145)对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮间充质转化(EMT)的影响.方法 人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒pCMV-miR-145.以未处理HK-2细胞为对照组;以TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1组;以pCMV-myc空白质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1空白质粒组;以pCMV-miR-145质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1+miR-145组.采用实时荧光定量PCR检测miR-145表达.采用Western blot检测TGF-β/Smad信号传导蛋白TGF-β1、Smad3、Smad2/3、p-Smad2/3,以及EMT生物标记物蛋白 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和I型胶原蛋白(ColⅠ)的表达水平.采用ELISA法检测培养细胞上清液中FN和Col I的含量.结果miR-145表达质粒构建成功,重组质粒有效转染TGF-β1诱导HK-2细胞.与对照组比较,TGF-β1+miR-145组细胞中miR-145表达上调(P<0.01);与对照组和TGF-β1+miR-145组比较,TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组细胞中miR-145表达均下降(P<0.01).与TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组比较,TGF-β1+miR-145组细胞内TGF-β1、Smad3、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量减少(P<0.05);α-SMA、FN、ColⅠ蛋白表达亦明显减少(P<0.05);TGF-β1+miR-145组培养液上清中FN、ColⅠ含量

作者:刘华;何小解;李国君;丁庆雄;梁晚霞;樊娟

来源:中国当代儿科杂志 2017 年 19卷 6期

知识库介绍

临床诊疗知识库该平台旨在解决临床医护人员在学习、工作中对医学信息的需求,方便快速、便捷的获取实用的医学信息,辅助临床决策参考。该库包含疾病、药品、检查、指南规范、病例文献及循证文献等多种丰富权威的临床资源。

详细介绍
热门关注
免责声明:本知识库提供的有关内容等信息仅供学习参考,不代替医生的诊断和医嘱。

收藏
| 浏览:183 | 下载:0
作者:
刘华;何小解;李国君;丁庆雄;梁晚霞;樊娟
来源:
中国当代儿科杂志 2017 年 19卷 6期
标签:
microRNA-145 TGF-β/Smad信号通路 上皮间充质转化 人肾小管上皮细胞 microRNA-145 TGF-β/Smad signaling pathway Epithelial-mesenchymal transition Human proximal tubular epithelial cell
目的 研究microRNA-145(miR-145)对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮间充质转化(EMT)的影响.方法 人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒pCMV-miR-145.以未处理HK-2细胞为对照组;以TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1组;以pCMV-myc空白质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1空白质粒组;以pCMV-miR-145质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1+miR-145组.采用实时荧光定量PCR检测miR-145表达.采用Western blot检测TGF-β/Smad信号传导蛋白TGF-β1、Smad3、Smad2/3、p-Smad2/3,以及EMT生物标记物蛋白 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和I型胶原蛋白(ColⅠ)的表达水平.采用ELISA法检测培养细胞上清液中FN和Col I的含量.结果miR-145表达质粒构建成功,重组质粒有效转染TGF-β1诱导HK-2细胞.与对照组比较,TGF-β1+miR-145组细胞中miR-145表达上调(P<0.01);与对照组和TGF-β1+miR-145组比较,TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组细胞中miR-145表达均下降(P<0.01).与TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组比较,TGF-β1+miR-145组细胞内TGF-β1、Smad3、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量减少(P<0.05);α-SMA、FN、ColⅠ蛋白表达亦明显减少(P<0.05);TGF-β1+miR-145组培养液上清中FN、ColⅠ含量