目的 观察重组人神经调节蛋白(recombinant neuregulin-1beta,rhNRG)-1β在氧和葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下通过细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对小鼠神经干细胞增殖能力的影响.方法 将怀孕14～ 17 d的小鼠处死,分离脑室管膜下区的脑组织,提取神经干细胞.采用体外细胞培养方法进行细胞传代和鉴定.神经干细胞鉴定采用SABC-FITC (POD)双标试剂盒,标记免疫荧光细胞化学法镜下检测巢蛋白(Nestin)表达.空白对照组:取鉴定后的神经干细胞,细胞数为2×107个,放入24孔培养板中,DMEM/F12完全培养液培养3 h;OGD组:取鉴定后神经干细胞,细胞数为2×107个,放入24孔培养板中,加入不含葡萄糖的DMEM/F12培养液,将培养板移入潮湿密闭容器内(37℃恒温培养),容器内含有氮气(950ml/L)和氧气(50 ml/L)的混合气体,缺糖缺氧培养1h后,再更换完全培养液培养3 h;OGD+ rhNRG-1β组:在OGD干预前先加入100 μg/L rhNRG-1β,再培养3h.神经球形成:分别取3组干细胞,反复吹打成单细胞,按细胞个数1×106/ml将神经干细胞接种到含多聚赖氨酸盖玻片上的培养板中,培养7d后取出盖玻片,相差镜下观察3组于细胞神经球形成,计算神经干细胞增殖变化;克隆形成:分别取3组于细胞,接种于60 mm培养皿中,细胞个数2×107个,完全培养液
作者：王铎；张雪梅；付锦
来源：中华地方病学杂志 2016 年 35卷 10期
