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目的:观察不同浓度17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)或甲基乙基酮(MEK)信号通路抑制剂U0126对小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)和钠/碘同向转运体(NIS)mRNA和蛋白表达,探讨MEK-ERK信号传导通路在哺乳期乳腺细胞摄碘中的作用。方法采用细胞体外培养的方法,对Balb/C小鼠哺乳期乳腺细胞进行传代培养,观察不同含量(0.0008、0.0040、0.0200、0.1000、0.5000 mg/L)E2刺激后,小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、ERK和NIS mRNA表达;细胞分组为U0126+ E2组[加入MEK的抑制剂U0126(20μmmol/L)30 min后,再加入E2(0.1 mg/L)]、E2组和对照组,培养24 h后,收集样本。用实时荧光定量PCR方法检测小鼠乳腺原代细胞中MEK、ERK和NIS mRNA表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测小鼠乳腺原代细胞总ERK、磷酸化ERK和NIS蛋白表达。结果在E2刺激试验中,随着E2含量的不断升高,哺乳期乳腺细胞ERK、NIS mRNA的表达量逐渐增加(F=28.23、18.37,P均<0.05)。在MEK抑制实验中,E2组NIS mRNA的表达量(1.90±1.36)较U0126+E2组(0.90±0.39)和对照组(0.76±0.18)高,组间比较差异均有统计学意义(t=3.218、2.737,P均<0.05);在总ERK蛋白表达中,E2组(1.62±0.30)最高,与U0126+E2组(1.19±0.32)和对照组(1.25±0.27

作者:徐朋;金星;史新竹;刘丽香;申红梅

来源:中华地方病学杂志 2016 年 35卷 12期

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作者:
徐朋;金星;史新竹;刘丽香;申红梅
来源:
中华地方病学杂志 2016 年 35卷 12期
标签:
哺乳期 乳腺细胞 雌二醇 甲基乙基酮 细胞外信号调节蛋白激酶 钠碘转运体 信号通路 Lactating Mammary gland cells 17β-estradiol Methyl ethyl ketone Extracellular signal-regulated protein kinase Na+/I-symporter Signaling pathway
目的:观察不同浓度17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)或甲基乙基酮(MEK)信号通路抑制剂U0126对小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)和钠/碘同向转运体(NIS)mRNA和蛋白表达,探讨MEK-ERK信号传导通路在哺乳期乳腺细胞摄碘中的作用。方法采用细胞体外培养的方法,对Balb/C小鼠哺乳期乳腺细胞进行传代培养,观察不同含量(0.0008、0.0040、0.0200、0.1000、0.5000 mg/L)E2刺激后,小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、ERK和NIS mRNA表达;细胞分组为U0126+ E2组[加入MEK的抑制剂U0126(20μmmol/L)30 min后,再加入E2(0.1 mg/L)]、E2组和对照组,培养24 h后,收集样本。用实时荧光定量PCR方法检测小鼠乳腺原代细胞中MEK、ERK和NIS mRNA表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测小鼠乳腺原代细胞总ERK、磷酸化ERK和NIS蛋白表达。结果在E2刺激试验中,随着E2含量的不断升高,哺乳期乳腺细胞ERK、NIS mRNA的表达量逐渐增加(F=28.23、18.37,P均<0.05)。在MEK抑制实验中,E2组NIS mRNA的表达量(1.90±1.36)较U0126+E2组(0.90±0.39)和对照组(0.76±0.18)高,组间比较差异均有统计学意义(t=3.218、2.737,P均<0.05);在总ERK蛋白表达中,E2组(1.62±0.30)最高,与U0126+E2组(1.19±0.32)和对照组(1.25±0.27