目的:观察布鲁菌外膜蛋白（OMP）16脂化型（L16）和非脂化型（U16）对成骨细胞的毒力效应。方法:利用大肠埃希菌BL21（DE3）原核表达系统制备L16和U16重组蛋白，并使用镍柱纯化。采用成组设计，利用小鼠成骨细胞系（MC3T3细胞）分别与L16和U16重组蛋白共孵育（L16、U16刺激组），以布鲁菌脂多糖（LPS）刺激物为阳性对照（LPS对照组），未加任何刺激的细胞作为阴性对照，孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力；离心收集培养细胞上清，生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶（LDH）的释放率，评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用；进一步使用Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率，以及通过免疫印迹法（WB）检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果:L16刺激组细胞活力[（56.16±1.63）
作者：任慧；杨恒；胡飞环；易嘉敏；黎诚耀；王文敬
来源：中华地方病学杂志 2021 年 40卷 6期
