目的 为了探寻一种更有效的家族性高胆固醇血症(FH)基因治疗新途径,通过慢病毒介导RNA干扰的方法在H22细胞系及C57BL/6J纯系小鼠中抑制内源性羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)基因表达进行研究.方法 从HMG-CoAR基因序列中选择三段作为靶序列(T1、T2和T3),并构建重组慢病毒RNAi载体；经体外包装后,分别感染H22细胞系及注射小鼠.通过qRT-PCR检测HMG-CoAR mRNA丰度；利用Western Blot、ELISA方法分析HMG-CoAR的表达水平.结果 与空载体对照相比,三个实验组中稳定转染细胞的HMG-CoAR表达水平显著降低(P＜0.05),同时感染5天后小鼠的肝脏HMG-CoAR mRNA水平、蛋白含量以及血浆中HMG-CoAR表达均显著降低(P＜0.05),其中T3位点的抑制效率最高,是空质粒对照的1/3.另外,对三个载体的持续性抑制能力分析显示,在处理后的至少50天内,三个实验组小鼠中HMG-CoAR表达量均有效地被抑制,其中T1靶点的抑制效果最为稳定,而T3靶点的波动最大,但抑制效率一直最高.结论 三个重组慢病毒RNAi载体均可显著抑制内源性HMG-CoAR表达,可为下一步试图通过下调HMG-CoAR表达的方式,降低FH患者体内胆固醇水平的FH基因治疗奠定基础.
作者：欧海龙；严忠海；焦飞
来源：中国动脉硬化杂志 2013 年 21卷 2期
