目的 探讨肿瘤坏死因子受体超家族1B(TNFRSF1 B) 196位基因多态性(T突变为G)与巨噬细胞TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应的相关性.方法 运用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA6.0-TN-FR2196Met和pcDNA6.0-TNFR2196Arg,采用脂质体转染法分别转染至巨噬细胞中,转染48 h后使用杀稻瘟菌素抗性筛选4周,建立稳定转染细胞系.将酶消化法培养的巨噬细胞分为四组:空白对照组、pcDNA6.0空质粒组、pcD-NA6.0-TNFR2196Met组及pcDNA6.0-TNFR2196Arg组.采用酶切及测序法鉴定重组质粒,RT-PCR检测肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)、cIAP1、cIAP2 mRNA的变化;Western blot检测p-JNK、cIAP1、cIAP2 、TNFR2及核因子κB(NF-κB)的蛋白表达;ELISA检测细胞上清液可溶性TNFR2 (sTNFR2)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平.结果 酶切测序结果显示成功构建了TNFR2基因196Met和196Arg表达载体.转染到巨噬细胞后,与空白对照组和pcDNA6.0空质粒组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组、pcDNA6.0-TNFR219Met组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和p-JNK的表达增高(P＜0.05);与pcDNA6.0-TNFR2196Met组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和p-JNK的表达明显降低(P＜0.05),TNFR2196Arg介导的NF-κB活性显著降低.结

作者：岳莉英；卫娜；白瑞；杨慧宇；王敏；边云飞

来源：中国动脉硬化杂志 2013 年 21卷 11期