目的 探讨提高骨髓间充质干细胞(BMMSC)向心肌样细胞分化的方法,观察整合素连接激酶(ILK)过表达促进BMMSC向心肌样细胞分化的效果.方法 用包含人野生型ILK cDNA和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒载体(Ad-GFP-ILK)转染体外培养的猪BMMSC,诱导其在BMMSC中高表达,并用高浓度(50 μmol/L)的5-氮杂胞苷(5-AZA)刺激诱导BMMSC向心肌样细胞分化.实验分为空白对照组(N组)、Ad-GFP转染组(Ad组)、5-AZA诱导组(5-AZA组)、Ad-GFP-ILK转染组(ILK组).用噻唑蓝(MTF)法检测各组细胞活力;培养至2周、4周时采用免疫细胞化学染色检测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)和α辅肌动蛋白(α-actinin)表达;4周时提取蛋白,Werstem blot检测cTnⅠ、缝隙连接蛋白43 (CX-43)、Caspase-3和ILK的表达.结果 MTT检测结果显示Ad组、5-AZA组比N组、ILK组细胞活力明显减弱(P＜0.05);但Ad组、5-AZA组之间,N组、ILK组之间比较均无统计学差异(P＞0.05).细胞培养至2周时,免疫细胞化学染色显示,5-AZA组、ILK组开始表达心肌特异性标记物cTnⅠ和α-actinin,而N组、Ad组均没有明显阳性表达.Western blot结果显示ILK蛋白在ILK组表达较其他组明显升高(P＜0.05).与N组、Ad组比较,5-AZA组、ILK组cTnⅠ表达明显升高(P＜0.05);而5-AZA组、ILK组之间,N组、Ad组之间则没有

作者：牡丹；原晖华；顾蓉；徐标

来源：中国动脉硬化杂志 2016 年 24卷 9期