目的构建Survivin反义RNA表达载体,从基因水平靶向封闭Survivin功能,为探讨喉癌细胞凋亡和增殖的影响奠定基础.方法将Survivin大部分编码序列cDNA片段反向插入pEGFP-C1载体,构建Survivin反义RNA表达载体.用脂质体转染技术将重组质粒转染人喉癌细胞株Hep-2,并利用G418(300 mg/ml的维持浓度)筛选,获得稳定细胞株(命名为HpEGFP/Survivin).用蛋白免疫印迹Western-blot从蛋白质水平检测反义Survivin RNA封闭Survivin的表达效果.结果构建的Survivin反义RNA表达载体(命名为pEGFP/Survivin),经酶切电泳和测序证实碱基序列的正确性.蛋白免疫印迹Western-blot结果表明,构建的Survivin反义RNA表达载体转染人喉癌细胞株Hep-2,从蛋白水平抑制了Survivin的表达,抑制率为30
作者：文连姬；金春顺；李长青；管国芳；赵丹；高丽芳；王丽华
来源：中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2005 年 11卷 4期
