目的克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β,并检测其在体外的表达情况,为下一步研究鼻咽癌中HSP90β功能奠定基础.方法提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA.用纯化的hHSP90βcDNA与PGEM Easy T Vector连接,构建中间载体PGEM-hHSP90β.将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,构建hHSP90β真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β.经酶切和测序后,用脂质体包裹转染COS细胞,采用RT-PCR和Western blot检测HSP90β的表达.结果酶切及测序鉴定表明,hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功,命名为pcDNA3.1(+)/hHSP90β.该表达质粒在体外转染COS细胞后可表达HSP90β分子.结论采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插到了真核表达载体pcDNA3.1(+)中;pcDNA3.1(+)/hHSP90β表达质粒能在体外表达HSP90β分子.
作者：刘涛；赵菊梅；梁传余；田聆；魏于全
来源：中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2005 年 11卷 5期
